电镜显微观察实验

透射电镜实验步骤：

实验准备

• 2% 磷钨酸盐的配制（0.2 g 的磷钨酸盐溶于10ml的无菌水中）；
• 菌悬液的配制（取稳定期的菌体溶于无菌水中，充分打散混匀，此步骤关系到照片质量，一定要仔细，精致）

实验流程

• 在分析测试中心提前预约,最后菌悬液和2% 磷钨酸盐溶液按1：1 比例混匀固定上机看样。

扫描电镜实验步骤：

实验准备：

• 0.2 mol/L磷酸缓冲液的配制

• 戊二醛固定液的配制

0.85%的生理盐水 25%、50%、75%、100% 的乙醇

实验流程：

• 取适量菌株细胞至1.5ml EP管中;
• 0.85% NaCL 生理盐水洗涤 2 遍（加生理盐水到EP管中，轻轻搅动，离心约 2000 rpm, 2 min）;
• 固定： 取 1 ml 2,5-戊二醛固定de30 min；
• 冲洗： 0.2 mol/L 无菌 PBS 溶液，或无菌水冲洗 2-3 遍（加入 EP 管中，轻轻搅动，离心）；
• 脱水（梯度乙醇脱水法）：依次用25%、50%、75%、100% 的乙醇对样品依次脱水；也可以直接用无水乙醇进行脱水（简单、快速、但效果一般）；
• 将样品滴到铝箔纸上，风干。即得到固定细菌后的样品；
• 扫描电镜上机前，还需经过喷金（此步骤在扫描电镜处完成）

  注意： 磷酸盐缓冲液最终浓度为0.1 mol/l; 市售的戊二醛浓度为25%的水溶液，需放冰箱4℃避光保存。为了保持 pH 值，最好用 PBS 溶液稀释，戊二醛有一定的毒性，操作时需做好保护措施，沾到皮肤后马上用大量水冲洗。