Published at 2021-03-17 20:05
Author:jiangxw
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名称 | 溶剂 |
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溶液Ⅰ | 45 g氢氧化钠于150 ml甲醇及150 ml蒸馏水。 |
溶液Ⅱ | 97.5 ml浓盐酸,137.5 ml甲醇溶于65 ml蒸馏水 |
溶液Ⅲ | 200 ml正己烷与200 ml甲基叔丁基醚混合均匀 |
溶液Ⅳ | 10.8 g氢氧化钠溶于900 ml蒸馏水 |
溶液Ⅴ | 饱和氯化钠溶液 |
取40 mg细菌培养物,置于8 ml螺口玻璃管中,加1 ml溶液Ⅰ(菌体量不宜过多,一定要打匀,否则实验没结果),拧紧螺盖,沸水浴5 min,取出震荡5-10 S,再度拧紧螺盖,继续沸水浴25 min。
待样品管冷却后,加入2 ml的溶液Ⅱ,盖严震荡,随后精确控制80±1 ℃水浴10 min,冷水浴冷却(此步骤严格控制温度和时间,以免羟基酸和环式脂肪酸受到破坏)。
在冷却的样品管中加入1.25 ml的溶液Ⅲ,快速震荡10min,低速离心5 min,弃下层水相。
在剩余有机相中加入3 ml的溶液Ⅳ(可加适量的溶液Ⅴ),快速震荡5 min,低速离心5 min。
分层不明显的再加适量的溶液Ⅴ,最后取上层有机相置气相色谱样品中备用。