脂肪酸分析的样品提取流程

Published at 2021-03-17 20:05

Author:jiangxw

View:449


一、配制溶液

自配溶液有:
名称 溶剂
溶液Ⅰ 45 g氢氧化钠于150 ml甲醇及150 ml蒸馏水。
溶液Ⅱ 97.5 ml浓盐酸,137.5 ml甲醇溶于65 ml蒸馏水
溶液Ⅲ 200 ml正己烷与200 ml甲基叔丁基醚混合均匀
溶液Ⅳ 10.8 g氢氧化钠溶于900 ml蒸馏水
溶液Ⅴ 饱和氯化钠溶液

二、提取步骤

  • 取40 mg细菌培养物,置于8 ml螺口玻璃管中,加1 ml溶液Ⅰ(菌体量不宜过多,一定要打匀,否则实验没结果),拧紧螺盖,沸水浴5 min,取出震荡5-10 S,再度拧紧螺盖,继续沸水浴25 min。

  • 待样品管冷却后,加入2 ml的溶液Ⅱ,盖严震荡,随后精确控制80±1 ℃水浴10 min,冷水浴冷却(此步骤严格控制温度和时间,以免羟基酸和环式脂肪酸受到破坏)。

  • 在冷却的样品管中加入1.25 ml的溶液Ⅲ,快速震荡10min,低速离心5 min,弃下层水相。

  • 在剩余有机相中加入3 ml的溶液Ⅳ(可加适量的溶液Ⅴ),快速震荡5 min,低速离心5 min。

  • 分层不明显的再加适量的溶液Ⅴ,最后取上层有机相置气相色谱样品中备用。