氧化酶和过氧化氢酶活性鉴定

一、氧化酶实验

所用试剂：API OX试剂（四甲基一对一苯二胺）

氧化酶又称细胞色素氧化酶。它是细胞色素酶系统的末端呼吸酶。做氧化酶试验时，氧化酶并不直接与试剂起反应，而是首先使细胞色素C氧化，然后氧化性的细胞色素C使对苯二胺氧化，产生颜色反应。因此本试验的结果又与细胞色素C的存在有关。试剂：1%二甲基对苯二胺盐酸盐或1%四甲基对苯二胺盐酸盐。测定方法：

1、 按Kovacs最初描述的测定方法

在培养皿内放一张滤纸，滤纸上加3～4滴新鲜试剂使其湿润。用玻棒、牙签或白金丝移植环（不可用铬丝或铁丝）。挑取对数生长期的菌苔涂在滤纸上，若菌苔在10s内变成紫色，则为阳性反应。有些菌氧化酶活性较弱，变色时间可比以上所述时间稍长。一般在60s以后变色或一直变色的为阴性反应。

2、 滤纸条法

即取白色洁净滤纸条蘸少许菌苔，加试剂1滴，阳性者立即呈粉红色。

3、 菌落法

将试剂直接滴在菌落上，阳性的菌落立即呈粉红色，继而变成深红色。为了加速颜色的改变，可在菌苔与试剂接触前先在菌苔上加1滴甲苯。

4、注意事项

①本试验应避免铁素污染，否则易出现假阳性。试剂最好现配现用。②培养基使用不当可造成错误结果，培养基中如含有亚硝酸盐，则可与试剂发生红色反应。如含有硝酸盐，当待试菌还原硝酸盐时亦可产生亚硝酸盐，从而造成错误结果。二甲基对苯二胺对亚硝酸盐不太敏感。③培养基中碳水化合物含量过高会抑制氧化酶反应，高于0.5%的葡萄糖含量。由于氧化产酸使培养基pH下降至5.0～5.5或更低时会出现假阴性结果。可用肉汁胨蔗糖培养基培养，待试细菌培养基的蔗糖可减少至0.5%。④所用试剂剧毒，应避免皮肤接触。

二、过氧化氢酶实验

所用试剂：3-10 % H₂O₂

具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢分解为水和初生态氧，继而形成分子氧，以气泡形式溢出。

其测定方法是：挑取固体培养基上对数生长期的菌苔置于干净玻片上，滴加3～10%的过氧化氢，观察结果。0.5min内有大量气泡产生的为阳性，不产气泡者为阴性。亦可直接将试剂加于固体培养基上的菌落，观察结果。